E colock
From 2006.igem.org
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E colock "self-cycling-E. coli"
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Member
Chiba 2006 http://chem.tf.chiba-u.jp/igem/ iGEM Chiba
『む』チーム
Concept
シアノバクテリアのもつ、生物時計システムＫａｉを大腸菌に導入し、周期的な動作をさせる。
How It Works
Ｋａｉシステムの導入
Ｋａｉシステムは最も単純で分子レベルでの解析が進んでいる、24時間周期の生体時計システムである。
Ｋａｉシステムは３つのタンパク質ＫａｉＡ、ＫａｉＢ、ＫａｉＣの行うリン酸化サイクルであり、ＫａｉＣとリン酸化ＫａｉＣの量により周期が発生する。
この振動は特定部位の転写を活性化するセンサーキナーゼＳａｓＡにより伝えられる。
Ｋａｉシステムのサイクルを蛍光たんぱく質の発現量により観測する。
Techinical Issues
1.Ｋａｉオペロンの導入
Ｋａｉ遺伝子は導入が可能だが、シアノバクテリア由来なので大腸菌内でＫａｉシステムが機能するだろうか？
2.同調機能の欠如
シアノバクテリアは光合成により、その周期をリセットしている。これにより全体の振動が同調している。
しかし、このリセットを行っている遺伝子は未だ同定されていないので、大腸菌の振動がバラバラになることが予想される。
→→①LacリプレッサーをKaiAプロモーター、KaiBCプロモーターの下流に置き、Kaiの振動を止める。
- これにより全体が同調する。
→→②AIが使える？？
Option
周期の制御
Ｋａｉタンパク質の変異株はその周期が様々であることが報告されている。
同様に変異株を作成し、任意の周期を持った“E clock”を作成したい。
